2.3.2.4 Klonierung mit pUC-Plasmiden: Unterschied zwischen den Versionen
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*einen Teil des lac z-Gens (für β-Galactosidase) (wird zum Test auf ein rekombinantes Plasmid in den Wirtszellen benötigt; dieses Teil heißt lac z', da das 3'-Ende des normalen lac z-Gens fehlt). | *einen Teil des lac z-Gens (für β-Galactosidase) (wird zum Test auf ein rekombinantes Plasmid in den Wirtszellen benötigt; dieses Teil heißt lac z', da das 3'-Ende des normalen lac z-Gens fehlt). | ||
| − | Ein intaktes pUC-Plasmid codiert den Anfangsteil der β-Galactosidase ('''α-Fragment'''). Die verwendeten Wirtszellen enthalten in der chromosomalen DNA einen anderen Teil des lac z-Gens (lac Z<sub>M 15</sub>), wobei nur der vordere Teil deletiert ist (5'-Ende). Die chromosomale DNA codiert den hinteren Teil der β-Galactosidase (ω-Fragment). Nur das α- und das ω-Fragment ergeben zusammen die funktionsfähige β-Galactosidase. | + | Ein intaktes pUC-Plasmid codiert den Anfangsteil der β-Galactosidase ('''α-Fragment'''). Die verwendeten Wirtszellen enthalten in der chromosomalen DNA einen anderen Teil des lac z-Gens (lac Z<sub>M 15</sub>), wobei nur der vordere Teil deletiert ist (5'-Ende). Die chromosomale DNA codiert den hinteren Teil der β-Galactosidase ('''ω-Fragment'''). Nur das α- und das ω-Fragment ergeben zusammen die funktionsfähige β-Galactosidase. |
Nach dem Transformationsschritt liegt folgende Situation in der Wirtszelle vor: | Nach dem Transformationsschritt liegt folgende Situation in der Wirtszelle vor: | ||
Aktuelle Version vom 21. November 2008, 22:10 Uhr
Die pUC-Plasmide enthalten insbesondere
- ein Antibiotika-Resistenzgen (wird zum Test der Plasmidaufnahme durch die Wirtszelle benötigt) und
- einen Teil des lac z-Gens (für β-Galactosidase) (wird zum Test auf ein rekombinantes Plasmid in den Wirtszellen benötigt; dieses Teil heißt lac z', da das 3'-Ende des normalen lac z-Gens fehlt).
Ein intaktes pUC-Plasmid codiert den Anfangsteil der β-Galactosidase (α-Fragment). Die verwendeten Wirtszellen enthalten in der chromosomalen DNA einen anderen Teil des lac z-Gens (lac ZM 15), wobei nur der vordere Teil deletiert ist (5'-Ende). Die chromosomale DNA codiert den hinteren Teil der β-Galactosidase (ω-Fragment). Nur das α- und das ω-Fragment ergeben zusammen die funktionsfähige β-Galactosidase.
Nach dem Transformationsschritt liegt folgende Situation in der Wirtszelle vor:
- Die meisten Zellen haben kein pUC-Plasmid aufgenommen. Infolge dessen gibt es kein α-Fragment und daher auch keine funktionsfähige β-Galactosidase, aber auch keine Ampicillin-Resistenz.
- Falls ein religiertes Plasmid aufgenommen wird, werden α- und ω-Fragment gebildet und es kann eine funktionsfähige β-Galactosidase sowie Resistenz gegen Ampicillin gebildet werden.
- Falls ein rekombinantes Plasmid aufgenommen wird (Fremd-DNA innerhalb des lac z-Gens) ist kein komplettes α-Fragment und daher auch keine funktionsfähige β-Galactosidase vorhanden, aber eine Resistenz gegen Ampicillin.
