2.3.2.3.3 Vorgehensweise zur Selektion und Identifikation rekombinanter Kolonien

Das Vorgehen bei der Selektion und Identifikation rekombinanter Kolonien soll am Beispiel des Plasmids pBR 322 verdeutlicht werden: Im Rahmen eines Klonierungsexperiments wurde das Plasmid pBR 322 verwendet, dessen Genkarte im Folgenden dargestellt ist:

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Enthält die transformierte Wirtszelle kein Plasmid, so ist sie Amp^s und Tet^s. Bei Aufnahme eines religierten Plasmids ist die Wirtszelle sowohl ampicillin- als auch tetracyclinresistent (Amp^r, Tet^r). Nur bei einem rekombinanten Plasmid ist die Wirtszelle Amp^s und Tet^r.

Eine Identifizierung der rekombinanten Kolonien kann daher durch Ausplattieren auf Nähragar mit Tetracyclin durchgeführt werden. Nach dem Bebrüten haben nur Wirtszellen mit einem Vektorplasmid Kolonien gebildet (oft kein regelmäßiges Koloniemuster).