2.3.3.3 Southern Hybridisierung (blotting, transfer)

Aus Biostudies
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Eine weitere Möglichkeit stellt die Southern Hybridisierung dar. Sie basiert auf folgender Vorgehensweise:

  1. Aus dem Agarosegel werden nach der DNA-Auftrennung die einzelnen Banden ausgeschnitten und die Gelstreifen in NaOH-Lösung gelegt (Denaturierung in Einzelstränge im Gel).
  2. Dann wird eine Glasplatte mit saugfähigem Filterpapier belegt, das mit einem Transferpuffer in Verbindung steht.
  3. Darauf werden die Gelstreifen mit geeignetem Abstand zueinander gelegt.
  4. Nun werden noch Nitrocellulose- oder Nylonmembranen aufgelegt, darüber angefeuchtetes Fließpapier und darüber mehrere Lagen trockenes Fließpapier und zuletzt alles mit Gewicht beschwert.
  5. Durch diesen Aufbau wird der Puffer vom und im Fließpapier hochgesaugt und nimmt dabei die DNA-Fragmente der Gelstreifen mit, wo sie im selben Muster wie vorher an der Membran hängenbleiben.
  6. Nun kann wie bei der Koloniehybridisierung fortgefahren werden.

Der gesamte Vorgang bis zur Hybridisierung wird oft als blotting bezeichnet.